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ELISA實驗的類型及原理

來源:廣州虹科電子科技有限公司   2025年06月20日 20:05   6

ELISA實驗,即酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)實驗,是免疫學(xué)中的經(jīng)典實驗之一,它是一種利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法,目前已被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、植物學(xué)、病理學(xué)等多種研究領(lǐng)域。

ELISA實驗基本原理:

ELISA實驗是將已知的抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面,然后利用酶標(biāo)記(偶聯(lián))的抗體或抗原與之孵育,再通過顯色物顯色,其顯色深淺與待測物質(zhì)的含量直接相關(guān),由此可進(jìn)行定性或定量分析。

ELISA實驗的常見類型:直接法、間接法、夾心法和競爭法

一、直接法(Direct ELISA):

原理:將抗原或抗體固定于酶標(biāo)板上,然后用酶標(biāo)抗體或抗原直接檢測。

主要用途:分析抗原的免疫反應(yīng)。

優(yōu)點

缺點

l 步驟少,實驗周期短,檢測速度快

l 不需二抗,交叉反應(yīng)較低,實驗不易出錯

l 實驗背景高,且檢測對象有限

l 靈活性差,需要針對每種靶蛋白的特異性一抗

l 檢測靈敏度不高,沒有使用二抗,信號沒有放大

二、間接法(Indirect ELISA):

原理:將抗原或抗體固定于酶標(biāo)板上,隨后分兩步進(jìn)行檢測,先加入檢測抗體或抗原進(jìn)行特異性結(jié)合,后加入酶標(biāo)二抗檢測并利用底物顯色。

主要用途:測定樣品中總抗體的濃度。

優(yōu)點

缺點

l 使用酶標(biāo)二抗,靈敏度高

l 標(biāo)記抗體更少,更加經(jīng)濟(jì),也更靈活

l 可能存在交叉反應(yīng),增加實驗背景

l 增加了二抗孵育步驟,實驗周期延長

三、夾心法(Sandwich ELISA):

雙抗體夾心法:將此方法常用于檢測抗原。將抗體固定在固相載體上,加入待測抗原,與抗體特異性結(jié)合,再加入酶標(biāo)抗體檢測,并利用底物顯色,即可測定總靶標(biāo)蛋白的含量。

雙抗原夾心法:反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似,用固相抗原和酶標(biāo)特異性抗原,分別代替固相抗體和酶標(biāo)特異性抗體,即可測定樣品中的抗體。

主要用途:對復(fù)雜樣品進(jìn)行分析,適用于檢測具有兩個以上識別位點的大分子蛋白。

優(yōu)點

缺點

l 靈敏度和特異性高

l 抗原無需事先純化

l 對配對抗體要求高

四、競爭法(Competitive ELISA):

原理:樣本中的抗原及預(yù)包被的酶標(biāo)抗原,競爭性地與固相抗體相結(jié)合。樣本中的抗原含量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原就越少,最終顯色也越淺。顯色結(jié)果與待檢抗原(或抗體)的量成反比。

主要用途:常用于只有一種抗體可用于目標(biāo)抗原的情況,也適用于檢測不能被兩種不同抗體結(jié)合的小抗原。

優(yōu)點

缺點

l 可檢測不純的樣品,數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高

l 可基于其他ELISA方法,靈活性高

l 整體敏感性和專一性較差

l 操作繁瑣復(fù)雜

點成生物--實驗室儀器解決方案:
ELISA-酶聯(lián)免疫吸附測定解決方案

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