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使用自動細(xì)胞計數(shù)儀進(jìn)行酵母細(xì)胞計數(shù)

來源:廣州虹科電子科技有限公司   2025年06月20日 19:16   9

概述

酵母可用于基礎(chǔ)研究、釀造和蒸餾以及食品生產(chǎn)等多種應(yīng)用,這些應(yīng)用的全過程都離不開準(zhǔn)確的細(xì)胞計數(shù)和活力測定。事實證明,較小的尺寸和形態(tài)對于自動細(xì)胞計數(shù)儀來說是相當(dāng)具有挑戰(zhàn)性的,利用活體染色劑手動計數(shù)酵母的方法繁瑣且容易出錯。在這篇文章中,我們分享了如何利用LUNA FX7自動細(xì)胞計數(shù)儀準(zhǔn)確可靠地對酵母細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。

實驗方法

1.將酵母菌株EC1118接種到Y(jié)PD肉湯中,30℃、200 rpm培養(yǎng)過夜

2.將酵母按照1:3至1:5的比例稀釋在1XPBS中

3.稀釋的培養(yǎng)物被稀釋成2個相等的樣品,然后將一份樣品熱滅活(65℃,20分鐘)以生成“活細(xì)胞和死細(xì)胞”,用于活力測試

4.使用酵母細(xì)胞緩沖液Ⅱ按細(xì)胞:緩沖液=1:5和1:10的比例進(jìn)一步稀釋細(xì)胞

5.活力測試:如表混合活細(xì)胞和死細(xì)胞

0%

25%

50%

75%

99%

活细胞

0μl

25μl

50μl

75μl

100μl

死细胞

100μl

75μl

50μl

25μl

0μl

實驗結(jié)果

1. LUNA-FX7自動細(xì)胞計數(shù)儀計測的細(xì)胞活力線性情況

為了確定細(xì)胞活力的線性情況,使用活細(xì)胞和死細(xì)胞制備各種活力的樣品,然后使用LUNA-FX7自動細(xì)胞計數(shù)儀進(jìn)行計數(shù)。使用LUNA-FX7,可以在熒光模式下檢查活力,也可以用明場模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]檢查。

為了在明場模式下測定細(xì)胞活力,將酵母樣品與相同體積的0.02%染色劑混合,并將10 μl樣品加載到LUNA細(xì)胞計數(shù)載玻片上。酵母樣品制備為死細(xì)胞(0%)、25%、50%、75%、活細(xì)胞(99%)。

使用LUNA-FX7 自動細(xì)胞計數(shù)儀

明場模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]測定細(xì)胞活力

用染色并標(biāo)記的酵母細(xì)胞

如圖所示,將5個樣品用0.02%的染色并在明場模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]中進(jìn)行圖像觀察與拍攝。重復(fù)計數(shù)3次,計算平均活力,并據(jù)此確認(rèn)細(xì)胞活力的線性情況。在LUNA FX7明場模式[CELL COUNTING & VIABILITY]測得的活力R2=0.9964,與理論活力高度吻合。

使用LUNA-FX7 自動細(xì)胞計數(shù)儀

明場模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]測定細(xì)胞活力

線性圖證實了測量的活力與理論預(yù)期的活力(R2=0.9964)

緊接著,為了研究熒光模式下的細(xì)胞活力,將5個酵母樣品用AO/PI 染色劑染色,并將10 μl樣品加載到Photoslide載玻片中。在AO/PI染色后,拍攝并觀察圖像。

如下圖所示,對5個不同活力的樣品進(jìn)行3次計數(shù),測得的酵母細(xì)胞活力為R2=0.9979,與理論活力具有顯著相關(guān)性。

使用LUNA-FX7 自動細(xì)胞計數(shù)儀

熒光模式下的[CELL LINES & PRIMARY CELLS,ADVANCED]測定細(xì)胞活力

用吖啶橙/碘化丙啶染色并標(biāo)記的酵母細(xì)胞

使用LUNA-FX7 自動細(xì)胞計數(shù)儀

熒光模式下的[CELL LINES & PRIMARY CELLS,ADVANCED]測定細(xì)胞活力

線性圖確認(rèn)了測量的活力和理論上預(yù)期的活力(R2=0.9979)

2. LUNA-FX7自動細(xì)胞計數(shù)儀細(xì)胞濃度分析的線性情況

為了確定使用LUNA-FX7 自動細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)酵母時不同濃度的線性,制備了高濃度酵母,并通過連續(xù)稀釋來測量濃度。

為了在明場模式下觀察,用0.02%染色,并分別在明場模式下的[TOTAL CELL COUNTING]和[CELL COUNTING & VIABILITY]中進(jìn)行計數(shù)。

從圖中可以看出,測得的R2值分別為0.998和0.9991。在熒光模式下也同樣觀察到這一點,當(dāng)用AO/PI染色并在[ADVANCED]模式下捕獲時,R2值為0.9753。這意味著使用LUNA-FX7進(jìn)行的酵母計數(shù)顯示出從高濃度到低濃度的高線性度,且使用LUNA-FX7可以進(jìn)行更準(zhǔn)確的測定。

在LUNA-FX7 自動細(xì)胞計數(shù)儀的明場模式下測量酵母樣品的濃度

總細(xì)胞計數(shù)

細(xì)胞計數(shù)和活力

在LUNA-FX7自動細(xì)胞計數(shù)儀熒光模式的[CELL LINES & PRIMARY CELLS, ADVANCED]中測量酵母樣品的濃度

2. LUNA-FX7自動細(xì)胞計數(shù)儀細(xì)胞濃度分析的線性情況

我們進(jìn)行了一項實驗來比較傳統(tǒng)使用的(Hemocytometer)和LUNA-FX7

與之前的實驗一樣,樣品用0.02%和AO/PI染色,并各10 µl裝載到、LUNA細(xì)胞計數(shù)載玻片和 PhotonSlide載玻片上。在LUNA-FX7的明場和熒光模式兩種模式下拍攝圖像,并將濃度與上測量的濃度進(jìn)行比較。如圖所示,測量的值與LUNA-FX7測量的值沒有觀察到顯著差異。

和LUNA-FX自動細(xì)胞計數(shù)儀的酵母計數(shù)結(jié)果比較

結(jié)論

在此實驗中,我們證明了LUNA-FX7可以準(zhǔn)確可靠地對酵母細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。此外,與傳統(tǒng)的手動計數(shù)方法相比,使用LUNA-FX7計數(shù)酵母的速度快20倍、更可靠且不易出錯。

點成生物細(xì)胞計數(shù)解決方案

作為全國的實驗室儀器集成商,點成生物始終致力于為客戶提供的實驗室設(shè)備解決方案。

點成Aligned genetics為用戶提供了的自動細(xì)胞計數(shù)儀設(shè)備,設(shè)備具有的精確度和可重復(fù)度,單次最多可檢驗8個樣品,細(xì)胞計數(shù)濃度范圍廣,內(nèi)置QC軟件提供值得信任的數(shù)據(jù),還符合21 CFR PART 11法規(guī)。

如果您對自動細(xì)胞計數(shù)儀感興趣,歡迎與我們聯(lián)系。

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