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細胞計數(shù)專題 | 熒光染料誘導的微生物培養(yǎng)基背景信號分析

2025-6-21 閱讀(10)

隨著點成微生物細胞計數(shù)儀 QUANTOM Tx™的推出,基于單細胞水平的細菌計數(shù)方法正在逐步取代傳統(tǒng)、耗時的 CFU/ml 測定。該儀器利用細胞膜通透性,借助熒光染料對細菌核酸進行染色,可在幾分鐘內(nèi)快速完成準確計數(shù)。

在微生物培養(yǎng)過程中,需根據(jù)菌種特性、生長條件及研究目標選擇合適的培養(yǎng)基。盡管常規(guī)培養(yǎng)基本身不具備自發(fā)熒光特性,但其成分可能與熒光染料發(fā)生相互作用,進而導致背景熒光增強,影響信號判讀。因此,建議實驗前將培養(yǎng)基(如添加了點成 QUANTOM™ 總細胞染色液)與熒光染料混合,評估背景噪聲水平差異,以優(yōu)化實驗條件。

結(jié)果與討論

本研究所測試培養(yǎng)基包括:營養(yǎng)肉湯(NB)、魯里亞-貝爾塔尼(LB)肉湯、無羊血的大豆肉湯(TSB)、含羊血的大豆肉湯(TSB-SB)、酵母提取物蛋白胨葡萄糖(YPD)培養(yǎng)基、de Man-Rogosa-Sharpe(MRS)培養(yǎng)基。

圖1 顯示培養(yǎng)基與QD試劑按1:10混合后的背景信號變化(A:GFP信號對比蒙太奇圖;B:柱狀圖量化分析)

未添加點成QUANTOM™總細胞染色液時,各培養(yǎng)基均未檢測到自發(fā)熒光背景信號。添加染色液后所有培養(yǎng)基均出現(xiàn)背景信號增強現(xiàn)象,其中MRS培養(yǎng)基背景噪聲顯著。建議實驗操作時避免將熒光染料直接與培養(yǎng)基混合,而應(yīng)使用PBS緩沖液稀釋培養(yǎng)細胞,以消除背景熒光干擾。

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