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廣州虹科電子科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PROFIBUS/PROFINET 通訊網(wǎng)關(guān)，板卡，診斷工具，以及自動(dòng)化配件，CAN/CANOPEN 接口卡，開(kāi)發(fā)工具，示波器，記錄儀 |
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2025-6-20 閱讀(8)
酵母可用于基礎(chǔ)研究、釀造和蒸餾以及食品生產(chǎn)等多種應(yīng)用，這些應(yīng)用的全過(guò)程都離不開(kāi)準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測(cè)定。事實(shí)證明，較小的尺寸和形態(tài)對(duì)于自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀來(lái)說(shuō)是相當(dāng)具有挑戰(zhàn)性的，利用活體染色劑手動(dòng)計(jì)數(shù)酵母的方法繁瑣且容易出錯(cuò)。在這篇文章中，我們分享了如何利用LUNA FX7自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀準(zhǔn)確可靠地對(duì)酵母細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。
1.將酵母菌株EC1118接種到Y(jié)PD肉湯中，30℃、200 rpm培養(yǎng)過(guò)夜
2.將酵母按照1：3至1：5的比例稀釋在1XPBS中
3.稀釋的培養(yǎng)物被稀釋成2個(gè)相等的樣品，然后將一份樣品熱滅活（65℃，20分鐘）以生成“活細(xì)胞和死細(xì)胞"，用于活力測(cè)試
4.使用酵母細(xì)胞緩沖液Ⅱ按細(xì)胞：緩沖液=1：5和1：10的比例進(jìn)一步稀釋細(xì)胞
5.活力測(cè)試：如表混合活細(xì)胞和死細(xì)胞
0% | 25% | 50% | 75% | 99% | |
活细胞 | 0μl | 25μl | 50μl | 75μl | 100μl |
死细胞 | 100μl | 75μl | 50μl | 25μl | 0μl |
1. LUNA-FX7自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)測(cè)的細(xì)胞活力線性情況
為了確定細(xì)胞活力的線性情況，使用活細(xì)胞和死細(xì)胞制備各種活力的樣品，然后使用LUNA-FX7自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行計(jì)數(shù)。使用LUNA-FX7，可以在熒光模式下檢查活力，也可以用明場(chǎng)模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]檢查。
為了在明場(chǎng)模式下測(cè)定細(xì)胞活力，將酵母樣品與相同體積的0.02%染色劑混合，并將10 μl樣品加載到LUNA細(xì)胞計(jì)數(shù)載玻片上。酵母樣品制備為死細(xì)胞(0%)、25%、50%、75%、活細(xì)胞(99%)。
使用LUNA-FX7 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
明場(chǎng)模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]測(cè)定細(xì)胞活力
用染色并標(biāo)記的酵母細(xì)胞
如圖所示，將5個(gè)樣品用0.02%的染色并在明場(chǎng)模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]中進(jìn)行圖像觀察與拍攝。重復(fù)計(jì)數(shù)3次，計(jì)算平均活力，并據(jù)此確認(rèn)細(xì)胞活力的線性情況。在LUNA FX7明場(chǎng)模式[CELL COUNTING & VIABILITY]測(cè)得的活力R2=0.9964，與理論活力高度吻合。
使用LUNA-FX7 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
明場(chǎng)模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]測(cè)定細(xì)胞活力
線性圖證實(shí)了測(cè)量的活力與理論預(yù)期的活力(R2=0.9964)
緊接著，為了研究熒光模式下的細(xì)胞活力，將5個(gè)酵母樣品用AO/PI 染色劑染色，并將10 μl樣品加載到Photoslide載玻片中。在AO/PI染色后，拍攝并觀察圖像。
如下圖所示，對(duì)5個(gè)不同活力的樣品進(jìn)行3次計(jì)數(shù)，測(cè)得的酵母細(xì)胞活力為R2=0.9979，與理論活力具有顯著相關(guān)性。
使用LUNA-FX7 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
熒光模式下的[CELL LINES & PRIMARY CELLS，ADVANCED]測(cè)定細(xì)胞活力
用吖啶橙/碘化丙啶染色并標(biāo)記的酵母細(xì)胞
使用LUNA-FX7 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
熒光模式下的[CELL LINES & PRIMARY CELLS，ADVANCED]測(cè)定細(xì)胞活力
線性圖確認(rèn)了測(cè)量的活力和理論上預(yù)期的活力(R2=0.9979)
2. LUNA-FX7自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀細(xì)胞濃度分析的線性情況
為了確定使用LUNA-FX7 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)酵母時(shí)不同濃度的線性，制備了高濃度酵母，并通過(guò)連續(xù)稀釋來(lái)測(cè)量濃度。
為了在明場(chǎng)模式下觀察，用0.02%染色，并分別在明場(chǎng)模式下的[TOTAL CELL COUNTING]和[CELL COUNTING & VIABILITY]中進(jìn)行計(jì)數(shù)。
從圖中可以看出，測(cè)得的R2值分別為0.998和0.9991。在熒光模式下也同樣觀察到這一點(diǎn)，當(dāng)用AO/PI染色并在[ADVANCED]模式下捕獲時(shí)，R2值為0.9753。這意味著使用LUNA-FX7進(jìn)行的酵母計(jì)數(shù)顯示出從高濃度到低濃度的高線性度，且使用LUNA-FX7可以進(jìn)行更準(zhǔn)確的測(cè)定。
在LUNA-FX7 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的明場(chǎng)模式下測(cè)量酵母樣品的濃度
總細(xì)胞計(jì)數(shù)
細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力
在LUNA-FX7自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀熒光模式的[CELL LINES & PRIMARY CELLS, ADVANCED]中測(cè)量酵母樣品的濃度
2. LUNA-FX7自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀細(xì)胞濃度分析的線性情況
我們進(jìn)行了一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)來(lái)比較傳統(tǒng)使用的(Hemocytometer)和LUNA-FX7。
與之前的實(shí)驗(yàn)一樣，樣品用0.02%和AO/PI染色，并各10 µl裝載到、LUNA細(xì)胞計(jì)數(shù)載玻片和 PhotonSlide載玻片上。在LUNA-FX7的明場(chǎng)和熒光模式兩種模式下拍攝圖像，并將濃度與上測(cè)量的濃度進(jìn)行比較。如圖所示，測(cè)量的值與LUNA-FX7測(cè)量的值沒(méi)有觀察到顯著差異。
和LUNA-FX自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的酵母計(jì)數(shù)結(jié)果比較
結(jié)論
在此實(shí)驗(yàn)中，我們證明了LUNA-FX7可以準(zhǔn)確可靠地對(duì)酵母細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。此外，與傳統(tǒng)的手動(dòng)計(jì)數(shù)方法相比，使用LUNA-FX7計(jì)數(shù)酵母的速度快20倍、更可靠且不易出錯(cuò)。
作為全國(guó)的實(shí)驗(yàn)室儀器集成商，點(diǎn)成生物始終致力于為客戶提供的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備解決方案。
點(diǎn)成Aligned genetics為用戶提供了的自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀設(shè)備，設(shè)備具有的精確度和可重復(fù)度，單次最多可檢驗(yàn)8個(gè)樣品，細(xì)胞計(jì)數(shù)濃度范圍廣，內(nèi)置QC軟件提供值得信任的數(shù)據(jù)，還符合21 CFR PART 11法規(guī)。
如果您對(duì)自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀感興趣，歡迎與我們聯(lián)系。
